重组AAV注射时间可调控病毒感染的效率及细胞类型
AAV的感染过程,如同一场精心编排的舞剧:受体结合、内吞、胞内运输、入核、脱壳、基因组释放,然后是基因表达的翩翩起舞。感染细胞后,AAV分为两种命运:裂解周期与溶源周期,前者在辅助病毒的助力下活跃,后者则在独立时保持低调,选择整合到宿主染色体的特定位置。
利用AAV载体实现神经元细胞特异性基因调控,策略主要涉及血清型选择、组织特异性启动子和注射方式。AAV的12种血清型和多种变体因其对组织的亲和性差异,可用于不同组织感染。通过改造AAV2 RC质粒,可以得到不同血清型的重组AAV,如AAV-Retro和AAV-BBB,后者可通过静脉注射穿越血脑屏障,针对全脑进行感染。
重组腺相关病毒载体(rAAV) 源于非致病的野生型腺相关病毒,由于其安全性好、宿主细胞范围广(分裂和非分裂细胞)、免疫源性低,在体内表达外源基因时间长等特点,被视为最有前途的基因转移载体之一,在世界范围内的基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用。
注射滴度取决于病毒制剂的滴度和可以输送的最大体积,而动物的年龄决定了可以成功感染的细胞类型。通过在 rAAV 构建体中加入报告基因或通过免疫组织化学和原位杂交检测,可以可视化和追踪基因表达。感染后时间的确定依赖于衣壳类型和感染的组织,通常需要等待约 2 周以检测 AAV 介导的基因表达。
腺相关病毒(AAV)作为基因研究和基因治疗载体,以其独特的特性和优势受到广泛关注。重组腺相关病毒载体(rAAV)因具备种类多样、免疫原性低、安全性高、宿主细胞范围广泛(对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力)、扩散能力强、体内表达基因时间长等优点,被视为最有前途的基因载体之一。