腺相关病毒的生产,纯化和保存
短期保存:将腺病毒置于4℃条件下保存。长期保存:将腺病毒置于80℃条件下保存,并避免反复冻融以降低病毒滴度。安全使用与注意事项:在进行腺病毒包装和操作时,应穿戴适当的防护装备。使用后应对实验器材进行消毒和灭菌处理,确保实验环境安全。应用:腺病毒载体在科研中有广泛应用,包括基因传递、细胞研究、动物模型实验等。
重组腺相关病毒(rAAV)的生产主要基于三质粒系统(核心质粒、血清型质粒、辅助质粒)在HEK293T细胞中的共转染。此过程在辅助质粒的帮助下,有效将带有内部重复末端(ITR)的目的DNA片段包装到rAAV病毒颗粒中,产生结构蛋白Cap和功能蛋白Rep。
病毒大量扩增与纯化 - 细胞铺板:将HEK293细胞铺至30-40个10cm dish,感染病毒,收集细胞裂解物,离心,收集上清,加入病毒沉淀液,冰上放置沉淀病毒,离心收集病毒悬浮液,透析后于-80℃保存。